脫氫酶活性檢測(cè) 細(xì)胞毒性測(cè)定
脫氫酶是一類能催化物質(zhì)(如糖類、有機(jī)酸、氨基酸)進(jìn)行氧化還原反應(yīng)的酶,在酶學(xué)分類中屬于氧化還原酶類。這些酶在反應(yīng)中被氧化的底物稱為氫供體或電子供體,而被還原的底物稱為氫受體或電子受體。當(dāng)受體是氧氣時(shí),催化該反應(yīng)的酶稱為氧化酶,其他情況下都稱為脫氫酶。不同的脫氫酶幾乎都根據(jù)其底物的名稱命名。生物體中絕大多數(shù)氧化還原反應(yīng)都是在脫氫酶及氧化酶的催化下進(jìn)行。物質(zhì)經(jīng)脫氫酶催化氧化,最后通過(guò)電子傳遞鏈而被氧氧化,此時(shí)通過(guò)氧化磷酸化作用生成腺苷三磷酸(ATP),是異養(yǎng)生物體取得能量的主要途徑。下面就將對(duì)脫氫酶的檢測(cè)進(jìn)行詳細(xì)介紹。
關(guān)于脫氫酶,可對(duì)其提供活性測(cè)定、km值測(cè)定、含量測(cè)定、吸光度測(cè)定、漏出率測(cè)定、比活力測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、波長(zhǎng)測(cè)定等檢測(cè)項(xiàng)目。
同時(shí)可對(duì)乳酸脫氫酶、乙醛脫氫酶、谷氨酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶、葡萄糖脫氫酶、磷酸脫氫酶等進(jìn)行檢測(cè)。
脫氫酶的測(cè)定方法主要包括活性污泥脫氫酶活性的測(cè)定和乳酸脫氫酶(LDH)的測(cè)定。活性污泥脫氫酶活性的測(cè)定旨在評(píng)價(jià)工業(yè)廢水的生物可降解性,通過(guò)測(cè)定活性污泥在不同工業(yè)廢水中脫氫酶活性的變化情況來(lái)評(píng)價(jià)工業(yè)廢水成分的毒性。這種方法基于脫氫酶是一類氧化還原酶,能夠催化氫從被氧化的物體轉(zhuǎn)移到另一個(gè)物體上,通過(guò)指示劑的還原變色速度來(lái)確定脫氫過(guò)程的強(qiáng)度。常用的指示劑有2,3,5三苯基四氮唑氯化物(TTC)或亞甲藍(lán),它們?cè)诮邮苊摎涿富罨臍涠贿€原時(shí)具有穩(wěn)定的顏色,通過(guò)比色的方法測(cè)量反應(yīng)后顏色深度來(lái)推測(cè)脫氫酶的活性。12
乳酸脫氫酶(LDH)的測(cè)定方法則更加具體,包括實(shí)驗(yàn)前的試劑配置、加樣、溫育、洗板、顯色和測(cè)量光密度值等步驟。這種方法通常使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)技術(shù),通過(guò)生物素標(biāo)記抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液的添加,以及底物溶液的顯色反應(yīng),最后測(cè)量各孔的光密度(OD)值來(lái)定量分析LDH的活性。
此外,乳酸脫氫酶同工酶的測(cè)定方法包括電泳法、離子交換柱層析法、免疫法、抑制法和酶切法等多種方法,這些方法能夠分離和測(cè)定LDH的不同亞型,從而提供更詳細(xì)的信息關(guān)于LDH在特定生理或病理?xiàng)l件下的作用。
1、DB34/T 1729-2012 窖泥中脫氫酶活性的分析方法
2、WS/T 361-2011 乳酸脫氫酶催化活性濃度測(cè)定參考方法
3、BS EN ISO 23753-2:2011 土壤質(zhì)量.土壤中的脫氫酶活性測(cè)定.氯化四氮唑法(INT)
4、KS I ISO 23753-2-2006(2016 土壤質(zhì)量土壤脫氫酶活性的測(cè)定第2部分:氯化碘三唑法
5、ISO 18187:2024 土壤質(zhì)量 利用土壤脫氫酶活性對(duì)固體樣品進(jìn)行接觸試驗(yàn)
6、UNE 81592:1991 生物控制 血液中 Δ-氨基酮酸脫氫酶(ALA-D)活性的測(cè)定 光譜法
7、KS I ISO 23753-2:2006 土壤質(zhì)量.土壤中脫氫酶活性的測(cè)定.第2部分:氯化四氮唑法(INT)
8、BS EN ISO 23753-2:2019+A1:2020 土壤質(zhì)量 土壤中脫氫酶活性的測(cè)定 使用氯化碘四唑 (INT) 的方法
9、BS EN ISO 18187:2018 土壤質(zhì)量 利用球形節(jié)桿菌脫氫酶活性進(jìn)行固體樣品接觸測(cè)試
10、KS I ISO 23753-1-2006(2016 土壤質(zhì)量土壤脫氫酶活性的測(cè)定第1部分:氯化三苯基四氮唑(TTC)法
11、ISO 23753-2:2019 土壤質(zhì)量.土壤中脫氫酶活性的測(cè)定.第2部分:碘特拉唑氯化物(INT)法
12、BS EN ISO 18187:2024 土壤質(zhì)量 利用球形節(jié)桿菌脫氫酶活性進(jìn)行固體樣品接觸試驗(yàn)
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