細(xì)胞因子活性檢測(cè) CMA資質(zhì)認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室
細(xì)胞因子由免疫細(xì)胞(如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等)和某些非免疫細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等)經(jīng)刺激而合成、分泌的一類(lèi)具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。細(xì)胞因子一般通過(guò)結(jié)合相應(yīng)受體調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和效應(yīng),調(diào)控免疫應(yīng)答。細(xì)胞因子(cytokine,CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)、APSC多能細(xì)胞以及損傷組織修復(fù)等多種功能。細(xì)胞因子可被分為白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子等。下面就將對(duì)細(xì)胞因子的檢測(cè)進(jìn)行詳細(xì)介紹。
關(guān)于細(xì)胞因子,可對(duì)其提供白細(xì)胞介素(IL) -1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、腫瘤壞死因子(TNF)-α、干擾素(IFN)-γ、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1、血小板源生長(zhǎng)因子(PDGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、巨噬細(xì)胞巨嗜堿性蛋白(MCP)-1、白介素-17A (IL-17A)、白介素-23 (IL-23)等檢測(cè)項(xiàng)目。
同時(shí)可對(duì)血液、組織、細(xì)胞培養(yǎng)物、體液(如血清、尿液、腦脊液)、腫瘤樣本等進(jìn)行細(xì)胞因子的檢測(cè)。
1、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
ELISA是一種常用的檢測(cè)細(xì)胞因子的方法。它通過(guò)將特異性抗體固定在試驗(yàn)板上,然后將待測(cè)樣品加入到板上,利用特異抗體與待測(cè)細(xì)胞因子結(jié)合,再加入特異性檢測(cè)抗體和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗,最后添加底物,測(cè)定光密度來(lái)確定細(xì)胞因子的濃度。
2、流式細(xì)胞儀
流式細(xì)胞儀可以用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞因子在單個(gè)細(xì)胞水平上的表達(dá)情況。它通過(guò)標(biāo)記特定的細(xì)胞因子抗體或標(biāo)記分子,在細(xì)胞水槽中運(yùn)行待測(cè)細(xì)胞懸液,然后通過(guò)激光束照射細(xì)胞,測(cè)量細(xì)胞因子的熒光強(qiáng)度來(lái)確定其表達(dá)水平。
3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)
qPCR可以用來(lái)測(cè)定細(xì)胞因子的mRNA水平。它通過(guò)與待測(cè)細(xì)胞因子的mRNA序列特異性雜交,然后使用熒光探針或染料來(lái)檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的累積量,進(jìn)而確定細(xì)胞因子的mRNA水平。
4、蛋白質(zhì)芯片
蛋白質(zhì)芯片是一種高通量檢測(cè)細(xì)胞因子的方法。通過(guò)將已知細(xì)胞因子的抗體固定在芯片上的不同點(diǎn)位上,然后將待測(cè)細(xì)胞因子加入到芯片上進(jìn)行反應(yīng),最后使用熒光標(biāo)記的二抗來(lái)檢測(cè)反應(yīng)產(chǎn)物,從而確定細(xì)胞因子的濃度。
5、化學(xué)發(fā)光
化學(xué)發(fā)光法可以用于檢測(cè)細(xì)胞因子的濃度。它通過(guò)在反應(yīng)體系中加入底物,在酶催化下發(fā)生發(fā)光反應(yīng),發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞因子的濃度成正比。需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和資源條件選擇合適的方法進(jìn)行細(xì)胞因子的檢測(cè)。
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