轉(zhuǎn)化酶活性檢測(cè) 抑制劑濃度分析化驗(yàn)
轉(zhuǎn)化酶為淡黃色至褐色粉末,可溶于水,不溶于乙醇,有較強(qiáng)吸濕性。也可是淡黃色微黏稠液體。主要作用為使蔗糖水解為葡萄糖和果糖(轉(zhuǎn)化糖)。同時(shí)改變其旋光性。轉(zhuǎn)化酶主要使蔗糖分解成轉(zhuǎn)化糖,從而得到比蔗糖的溶解度更高、不易有糖結(jié)晶析出的高濃度糖液,用于冰淇淋、巧克力、蜜餞、各種糖果、果醬等中。亦用于生產(chǎn)人造蜂蜜及從食品中除去蔗糖。下面就將對(duì)轉(zhuǎn)化酶的檢測(cè)進(jìn)行詳細(xì)介紹。
關(guān)于轉(zhuǎn)化酶,可對(duì)其提供酶活性檢測(cè)、分析化驗(yàn)、含量檢測(cè)、濃度檢測(cè)、成分分析、定性定量檢測(cè)、未知物分析鑒定、酶底物、產(chǎn)物濃度、pH值、溫度、抑制劑濃度、共同刺激物、離子濃度、濃度效應(yīng)、酶抗體等檢測(cè)項(xiàng)目。
同時(shí)可對(duì)蔗糖轉(zhuǎn)化酶、乙醇轉(zhuǎn)化酶、C3轉(zhuǎn)化酶、酸性轉(zhuǎn)化酶、蜂蜜轉(zhuǎn)化酶、脫脂轉(zhuǎn)化酶等進(jìn)行檢測(cè)。
轉(zhuǎn)化酶的測(cè)定方法主要包括間苯二酚比色法和二硝基水楊酸法。
1、間苯二酚比色法是一種常用的轉(zhuǎn)化酶測(cè)定方法。該方法涉及以下幾個(gè)步驟:
a.樣品提?。簩?shí)驗(yàn)材料(如植物葉片或種子)磨碎后,在110℃烘箱中烘15min,然后調(diào)制70℃烘干至恒重。取50mg樣品倒入10ml刻度離心管內(nèi),加入4ml 80%乙醇,在80℃水浴中不斷攪拌40min,離心后收集上清液,其殘?jiān)?ml 80%乙醇重復(fù)提取2次,合并上清液。最后,用80%乙醇定容至10ml,過濾后得到濾液用于測(cè)定。
b.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:取蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液用80%乙醇稀釋成系列濃度的溶液(如0、10、20、30、40、60、80、100ug/ml)。分別取0.4ml溶液,加入200ul 2mol/L NaOH,100℃煮沸5min,冷卻后加入2.8ml 30%HCl和0.8ml 0.1%間苯二酚,搖勻后在80℃水浴反映10min,冷卻后再480nm測(cè)定OD值,以0濃度管調(diào)零。繪制蔗糖濃度-OD值曲線。
c.顯色測(cè)定:取提取液0.4ml,按上述步驟進(jìn)行蔗糖含量的測(cè)定,讀取OD值,并從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到提取液中的糖含量,然后再計(jì)算樣品中的轉(zhuǎn)化酶含量。
2、二硝基水楊酸法也是一種測(cè)定轉(zhuǎn)化酶活性的方法,該方法通過測(cè)量還原糖與二硝基水楊酸反應(yīng)產(chǎn)生的顏色變化來定量轉(zhuǎn)化酶的活性。具體步驟包括在特定條件下使轉(zhuǎn)化酶與蔗糖反應(yīng),然后使用光度計(jì)在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值,通過比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度來確定轉(zhuǎn)化酶的活性。
這些方法提供了測(cè)定轉(zhuǎn)化酶活性和含量的有效手段,適用于不同領(lǐng)域的研究和應(yīng)用。
1、GB/T 40152-2021 蜂蜜中蔗糖轉(zhuǎn)化酶的測(cè)定 分光光度法
2、DIN 10759:2016-12 蜂蜜分析.蔗糖酶活性的測(cè)定.西根塔勒法
3、T/NAIA 010-2020 土壤蔗糖酶活性的測(cè)定 3,5-二硝基水楊酸比色法
4、DIN 10759:2016 蜂蜜的分析研究.蔗糖酶活性的測(cè)定.西根哈勒法
5、BS EN 12146:1997 水果汁和蔬菜汁.蔗糖的酶素測(cè)定.NADP分光光度測(cè)量法
6、DIN 10759 E:2015-10 蜂蜜的分析研究 蔗糖酶活性的測(cè)定 西根哈勒法
7、T/GXAS 054-2020 糖料甘蔗蔗汁糖度、蔗糖分試驗(yàn)方法
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